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CRISPR-Cas9玉米基因組編輯方法取得進(jìn)展

2018-04-08 19:41:05   

基于CRISPR-Cas9系統(tǒng)的基因編輯工具近年來(lái)在醫(yī)療、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。研究人員選擇了若干玉米減數(shù)分裂特異基因的啟動(dòng)子用于驅(qū)動(dòng)Cas9基因的表達(dá),希望在配子中實(shí)現(xiàn)高效的基因組編輯,從而在T1代獲得大量純合或雙等位的突變體。其中用到的一個(gè)為玉米DMC1基因啟動(dòng)子,構(gòu)建了DPC(DMC1 promoter-controlled)CRISPR-Cas9載體系統(tǒng),用該載體系統(tǒng)轉(zhuǎn)化玉米幼胚后,結(jié)果意外發(fā)現(xiàn):凡是抗性愈傷組織靶位點(diǎn)均發(fā)生基因組編輯, T0代植株中出現(xiàn)60-70%左右的純合或雙等位的突變體,其余為雜合或嵌合的突變體植株。并且這些純合或雙等位突變體植株(再生自一個(gè)抗性愈傷組織)含有不同的突變allele類型。通過(guò)對(duì)多個(gè)基因靶點(diǎn)(包括一個(gè)標(biāo)記基因zb7,突變能產(chǎn)生白化的表型)的編輯實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了該載體系統(tǒng)的高效性。這一技術(shù)為研究細(xì)胞分裂突變體的基因功能提供了非??焖俑咝У姆椒ǎ?dāng)代純合或嵌合突變體就可以直接觀察細(xì)胞學(xué)及染色體行為與功能。

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